2X 探針法qPCR Mix （TaqMan熒光定量PCR試劑盒）是基于熒光探針檢測的即用型 PCR 試劑盒，可以對靶片段進行實時定量 PCR 分析（quantitative PCR、qPCR）。

產品含有經過優(yōu)化的緩沖液組分、熱啟動 Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 穩(wěn)定劑、dNTPs、MgCl2和穩(wěn)定劑等所有實時定量 PCR 所需要的成分

熒光定量PCR（qPCR）是大家常用的分子生物學技術，根據實驗方法的不同

qPCR可以分為染料法（SYBR Green法為代表）和探針法（Taqman法為代表）

因為操作簡單，價格便宜，SYBR Green法qPCR 受到了更為普遍的使用。

但是SYBR Green法并非萬能的，在很多時候SYBR Green無法滿足實驗的需要

Taqman qPCR特異性強，信噪比高，能夠適用于多重qPCR，數據更具說服力

Taqman法qPCR的原理:

Taqman是一段短的單鏈DNA探針，能夠和模板DNA進行退火。Taqman探針的5’端帶有一個報告基團（R），3’端帶有一個猝滅基團（Q）。報告基團所發(fā)出的熒光會被猝滅基團所吸收，因此正常情況下熒光探針是不會發(fā)出熒光的。在PCR的延伸過程中，DNA聚合酶沿著模板鏈從5’到3’的方向合成新鏈，當DNA聚合酶到達Taqman探針結合位點時，DNA聚合酶的5’-3’外切酶活性會將Taqman探針進行水解，導致Taqman探針的報告基團脫離了猝滅基團，從而發(fā)出熒光?？梢愿鶕晒庵档母叩停袛郟CR過程中目的片段產生的多少，從而實現(xiàn)對目的基因進行實時定量。

在Taqman qPCR中，上下游引物只有擴增探針所結合的片段時，才會產生熒光，非特異擴增是不會產生熒光的，因此Taqman qPCR的特異性非常好。另外，可以用不同的報告基團，標記多個熒光探針，實現(xiàn)在一管PCR體系中，同時對多個基因進行定量，這樣不僅實驗的通量大大提高，而且實驗的一致性也更好。

什么時候需要使用探針法qPCR:

相對于SYBR Green qPCR，探針法qPCR需要設計和合成特異的熒光探針，增加了設計難度和實驗成本。但是，當你遇到如下情況時，Taqman qPCR是你的第一選擇。

>>>1.基因檢測

以Taqman為代表的探針法qPCR最常用的應用場景就是基因檢測，包括醫(yī)療診斷，環(huán)境微生物檢測，轉基因檢測等。這些應用場景對結果的特異性要求非常高，而染料法qPCR的結果很容易受到非特異性擴增的干擾，因此一般都是使用Taqman qPCR進行檢測。

>>>>2.很難設計特異性引物

qPCR對引物的擴增效率要求很高，如果用相對定量法（Livak法）進行數據分析，需要保證引物的擴增效率在90%到105%之間，否則最后得到的數據不真實。然而有時候，為了保證擴增的特異性，只能在某個特異位點設計引物，從而犧牲了一些其它的引物設計原則，比如GC含量過高，引物有二級結構等，導致qPCR擴增的效率過低。這種情況下用Taqman qPCR可以很好的解決這一點，因為Taqman 探針本身就可以保證特異性，因此設計引物的時候有更多靈活性，更容易設計擴增效率高的引物對。

>>>>3.發(fā)表高水平文章

由于Taqman法比SYBR Green法具有更好的特異性，實驗結果更接近真實，所以很多高水平文章更青睞于Taqman qPCR的結果。特別是一些關鍵基因的關鍵結果，如果有Taqman qPCR的數據，會給你的文章加分不少。